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| Der Farbumschlag eines Indikators ist ein sensitiver Marker für die mitochondriale Aktivität in der Zelle.
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Die motochondrielle Aktivität in den Zellen wird als Mass für die zytotoxische Wirkung verwendet. Das Bild zeigt die Gewebe in den 24-Well Platten von oben fotografiert, nachdem die MTT-Metabolisierung durchgeführt wurde. Violette Gewebebereiche waren metabolisch aktiv und haben MTT zum farbigen Formazan-Salz umgesetzt. Im nächsten Schritt wird das wasserunlösliche Formazansalz mit Isopropanol extrahiert, um die Absorbtion der Isopropanollösung bei 570nm zu quantifizieren.
Succinatdehydrogenase Aktivitäts-Messung (MTT-Assay)
Prinzip:
Das Enzym ist in den Mitochondrien lokalisiert und wandelt den gelben, wasserlöslichen Farbstoff Diphenyltetrazoliumbromid (MTT) in ein violettes, wasserunlösliches Produkt (MTT-Formazan) um.
Durchführung:
Am Ende der Inkubation mit der Prüfsubstanz werden die Proben (Zellen, Gewebe) in Medium und mit MTT während 10 – 60 Minuten bei 37 Grad Celsius inkubiert. Mit einer alkoholischen Lösung wird der in den Zellen angereicherte Farbstoff herausgelöst und die Menge spektrophotometrisch bei 570 nm in einem Mikrotestplatten-Lesegerät bestimmt. Die Farbstoff-Menge entspricht der mitochondrialen Aktivität und somit der metabolischen Aktivität in den Zellen. Diese kann (in der Regel), muss aber nicht, mit der Anzahl lebender Zellen korrelieren. Deshalb müssen Ergebnisse mit dem MTT-Test (z.B. mit einem zweiten Endpunkt) verifiziert werden.
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| Literatur, Links und Dokumente |
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